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上海遠慕生物科技有限公司

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF】參數說明_化學性質_操作步驟
點擊次數:4370 更新時間:2018-03-28

上海遠慕生物現貨供應苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF,詳細為您講述產品相關咨訊,本司所銷售的產品有:ELISA試劑盒,培養基,動物血清,標準品對照品,抗體,生化試劑,溶液,化學試劑,實驗耗材,生物分子,酶類,碳水化合物,細胞培養及其他系列等,價格便宜,品種齊全,歡迎訂購!

 

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF參數說明】

中文名:苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF

英文名:Benzamidine Sepharose 4FF

供應商:上海遠慕

基質:4%交聯瓊脂糖

形狀:球形

粒徑:45~165 μm

耐壓:0.3MPa

耐熱:120℃,pH7,水中20min

zui高流速:250cm/h

排阻極限:60000~20×106 (球蛋白)

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF】參數說明_化學性質_操作步驟

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF】參數說明_化學性質_操作步驟

 

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF化學性質】

外觀:本品為乳白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。

保存:產品應密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20% 乙醇),通風、干燥、清潔的地方;不能冷凍,用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。

保質期:暫定5年。

應用:本產品為傳統的瓊脂糖介質,具有非特異性吸附低,回收率高,可多次重復使用等特點,用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠色譜純化。

用途:生化研究;巨大分子病毒、疫苗的分離。

化學穩定性:以下溶液中40℃下穩定;2mol/L NaOH;70%EtOH;30%異丙醇;30%乙腈;1%SDS;6mol/L鹽酸胍;8mol/L尿素。

性狀:含20%乙醇,底部為乳白色膠體。高度偶聯的瓊脂糖凝膠,大大加強了機械性能,快流速;經去電核處理,非特異性吸附極低,樣品回收率高;*的化學穩定性,可用多種促溶劑、有機溶劑操作和1-2M NaOH在位清洗。

 

【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF操作步驟】

1.裝柱:

a、讓所有的材料和試劑達到室溫;配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

b、根據柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。

c、將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。

d、用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡;打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。

e、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定;用2~3柱體積的緩沖液平衡柱子。

2.平衡:

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變;平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上樣:

a、樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

b、一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。

c、介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度;鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強,介質對組分吸附牢。

4.洗脫:

疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫;加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。

5.再生:

一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用;若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

6.在位清洗:

a、對于以離子鍵結合上去的蛋白,可以用2MNacl去除。

b、對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類,可用1MNaOH去除。

c、對強疏水性結合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡;清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.去熱源:

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時;或用以下方法步驟去除:

a、2倍柱體積的70%乙醇;

b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;

c、1倍柱體積4M尿素;

d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNaCl;上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

8.消毒:

用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

 

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